LRP1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400638-ACT

LRP1 (low-density lipoprotein receptor–related protein 1) è un recettore endocitico e di segnalazione multifunzionale che lega ligandi diversi, tra cui lipoproteine contenenti apolipoproteina E, complessi α2-macroglobulina–proteasi e fattori associati alla matrice extracellulare. Regola la captazione e il traffico mediati da recettore, controlla la rimozione delle proteasi extracellulari e coordina la segnalazione attraverso vie quali MAPK/ERK, PI3K/AKT e TGF-β in modo dipendente dal tipo cellulare. Nell’uomo LRP1 influenza la gestione dei lipidi, la migrazione cellulare e l’omeostasi vascolare, ed è stato implicato in neurobiologia attraverso ruoli nel trasporto dell’amiloide-β e nella regolazione sinaptica. Un’alterata espressione o funzione di LRP1 è associata a tratti cardiometabolici, a processi legati all’aterosclerosi e a meccanismi rilevanti per neurodegenerazione e cancro che coinvolgono il rimodellamento della matrice extracellulare e la segnalazione dei fattori di crescita.

LRP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LRP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LRP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LRP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LRP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LRP1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LRP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LRP1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LRP1 nelle cellule tumorali con espressione di LRP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.