LRF/Pokemon Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421462

Panoramica

Zbtb7a codifica LRF/Pokemon, un fattore di trascrizione a dita di zinco BTB/POZ che regola l’impegno di linea, la proliferazione e la sopravvivenza attraverso il legame al DNA in modo sequenza-specifico e il reclutamento di complessi corepressori. In ambito ematopoietico e immunitario contribuisce a coordinare i programmi di sviluppo delle cellule B e T, influenza la maturazione eritroide e modula reti trascrizionali associate alla differenziazione. LRF/Pokemon interagisce con vie che controllano i checkpoint del ciclo cellulare e le risposte allo stress, inclusa un’antagonizzazione funzionale del segnale oncosoppressore ARF–p53, e può rimodellare gli stati della cromatina nei loci bersaglio. Alterazioni dell’attività di Zbtb7a sono state implicate in programmi trascrizionali oncogenici e in fenotipi di differenziazione anomali in modelli di neoplasie ematologiche e solide, rendendolo un nodo rilevante per studi meccanicistici della tumorigenesi e del controllo del destino cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LRF/Pokemon (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Zbtb7a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Zbtb7a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Zbtb7a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LRF/Pokemon.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Zbtb7a per lo studio della segnalazione di LRF/Pokemon, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Zbtb7a critici per la funzione di LRF/Pokemon
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Zbtb7a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LRF/Pokemon CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal LRF/Pokemon CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Zbtb7a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LRF/Pokemon Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR LRF/Pokemon (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Zbtb7a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Zbtb7a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.