Plásmido CRISPR de Activación (h) LOXL2: sc-401021-ACT

La LOXL2 humana (lysyl oxidase like 2) es una aminooxidasa secretada dependiente de cobre que cataliza la desaminación oxidativa de residuos de lisina en el colágeno y la elastina, promoviendo el entrecruzamiento covalente y la maduración de la matriz extracelular (MEC). Mediante la remodelación de la MEC, LOXL2 regula la adhesión celular, la migración y la mecanotransducción, e interactúa con vías vinculadas a la transición epitelio‑mesénquima, la fibrosis tisular y la remodelación del estroma. La expresión y actividad desreguladas de LOXL2 se asocian con frecuencia con cambios en la rigidez de la matriz y fenotipos invasivos en la biología del cáncer, así como con microambientes fibróticos e inflamatorios. Estas funciones convierten a LOXL2 en un objetivo útil para estudiar la regulación del comportamiento celular impulsada por la MEC, procesos relacionados con la metástasis y la señalización del microambiente.

LOXL2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LOXL2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LOXL2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LOXL2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LOXL2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LOXL2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LOXL2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LOXL2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LOXL2 en células tumorales con expresión de LOXL2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.