LOX CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400973-ACT

ヒトLOX（リシルオキシダーゼ）は、分泌型の銅依存性アミンオキシダーゼをコードしており、コラーゲンおよびエラスチン中のリシン残基の酸化的脱アミノ化を触媒する。その結果、共有結合性の架橋形成を開始し、細胞外マトリックスを安定化させる反応性アルデヒドが生成される。LOXは、マトリックスの硬さや構築（アーキテクチャ）を調節することを通じて、細胞接着、遊走、メカノトランスダクション、ならびに創傷修復や線維化に関連する組織リモデリングプログラムに影響を及ぼす。さらにLOX活性は、低酸素応答性シグナル伝達や細胞外マトリックスの組織化に関わる経路と交差し、炎症反応および間質反応の形成に寄与する。LOX発現の異常は、線維性疾患でみられる病的なマトリックスリモデリングや、腫瘍微小環境のリモデリングと関連づけられており、細胞外マトリックス生物学における機構的ハブとしての有用性を支持している。

LOX CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LOXの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LOX CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LOX 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLOX転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LOXの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLOX遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLOX依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLOX発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLOX経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。