Plásmido Doble Nickase (h) LMX1B: sc-402945-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)LMX1B consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa LMX1B (h) y el plásmido de doble nickasa LMX1B (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a LMX1B. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: LMX1B Anticuerpo (1D12): sc-293262
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) LMX1B | sc-402945-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) LMX1B | sc-402945-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LMX1B codifica un factor de transcripción homeobox tipo LIM que regula la especificación del destino celular y el patrón tisular durante el desarrollo, con funciones destacadas en la dorsalización de las extremidades, la diferenciación de los podocitos renales y la identidad de subtipos neuronales. A través de interacciones con cofactores mediante sus dominios LIM y de la unión al ADN a través de su homeodominio, LMX1B coordina programas transcripcionales que influyen en la organización de la matriz extracelular, la dinámica del citoesqueleto y las redes de señalización de morfógenos. La alteración genética de LMX1B se asocia con el síndrome uña-rótula y con disfunción de podocitos y manifestaciones renales, lo que lo convierte en un objetivo relevante para estudiar la regulación génica del desarrollo y la biología glomerular. Además, se ha investigado la expresión alterada de LMX1B en el contexto de estados de linaje de células cancerosas y la reconfiguración de redes transcripcionales.
LMX1B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LMX1B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LMX1B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LMX1B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LMX1B alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.