Plásmido CRISPR de Activación (h) LMX1B: sc-402945-ACT

LMX1B codifica un factor de transcripción LIM-homeobox que regula la especificación de linajes y la morfogénesis de órganos, con funciones destacadas en el patrón dorsal de las extremidades, el desarrollo de los glomérulos renales y la diferenciación neuronal. En el núcleo, LMX1B se une al ADN mediante su homeodominio y coordina programas transcripcionales a través de interacciones proteicas mediadas por dominios LIM, modelando la identidad celular y las redes génicas del desarrollo. La actividad desregulada de LMX1B se asocia con síndromes congénitos que implican anomalías en uñas, esqueleto y riñón, y su expresión alterada se ha investigado en contextos de disfunción de podocitos y fenotipos del neurodesarrollo. Como regulador del desarrollo, LMX1B se utiliza ampliamente para estudiar el control transcripcional, la lógica de los potenciadores (enhancers) y las transiciones de destino celular en modelos celulares humanos relevantes.

LMX1B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LMX1B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LMX1B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LMX1B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LMX1B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LMX1B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LMX1B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LMX1B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LMX1B en células tumorales con expresión de LMX1B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.