Particules Lentivirales d'Activation (h) LHX1: sc-403100-LAC

LHX1 (LIM homeobox 1) code un facteur de transcription à domaine LIM qui associe la liaison à l’ADN au recrutement de cofacteurs afin de contrôler des réseaux de régulation génique du développement. Il contribue aux programmes de spécification du destin cellulaire et de mise en place des tissus, y compris des processus pertinents pour l’embryogenèse précoce et l’organogenèse, en coordonnant des modules transcriptionnels en aval de voies morphogénétiques telles que les signalisations WNT, BMP et FGF. En biologie humaine, une régulation altérée de LHX1 est associée à des anomalies congénitales du développement et a été étudiée dans des contextes où l’identité de lignée et les états de différenciation deviennent dysrégulés. En tant que régulateur nucléaire de la transcription, LHX1 est fréquemment utilisé comme marqueur et nœud fonctionnel dans des études portant sur la signalisation du développement, les circuits transcriptionnels et la reprogrammation de lignée.

Les particules d'activation lentivirales LHX1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de LHX1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales LHX1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription LHX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de LHX1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif LHX1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.