Plásmido CRISPR de Activación (h) LGR5: sc-400726-ACT

LGR5 (receptor acoplado a proteína G 5 que contiene repeticiones ricas en leucina) es un receptor de siete dominios transmembrana que funciona como marcador de células madre y progenitoras en múltiples epitelios, incluidos las criptas intestinales y los folículos pilosos. Actúa como receptor de alta afinidad para las R-spondinas y potencia la señalización canónica WNT/β-catenina al estabilizar los complejos receptores Frizzled/LRP, apoyando así programas de autorrenovación, proliferación y regeneración tisular. Mediante la modulación de redes transcripcionales impulsadas por WNT, LGR5 ayuda a regular las trayectorias de diferenciación y las interacciones con el nicho en tejidos en desarrollo y adultos. La expresión desregulada de LGR5 y la hiperactivación de la vía WNT se asocian con frecuencia con la biología tumoral y se utilizan para estudiar estados similares a células madre cancerosas y la plasticidad de linaje en sistemas modelo humanos.

LGR5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LGR5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LGR5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LGR5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LGR5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LGR5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LGR5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LGR5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LGR5 en células tumorales con expresión de LGR5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.