Plásmido CRISPR de Activación (h) LGA: sc-404294-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) LGA es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) LGA incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR LGA (h) y el plásmido de activación CRISPR LGA (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de GLS2. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: LGA Anticuerpo (175I2M): sc-517626
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) LGA | sc-404294-ACT | 20 µg | $397.00 |
El GLS2 humano codifica la isoforma mitocondrial de la glutaminasa LGA, una enzima clave que convierte la glutamina en glutamato y amoníaco para sostener el flujo de carbono y nitrógeno hacia el ciclo del TCA (ciclo de los ácidos tricarboxílicos) y las vías biosintéticas asociadas. Mediante la regulación del uso de glutamina, GLS2 influye en el equilibrio redox celular a través de la síntesis de glutatión y afecta el metabolismo mitocondrial bajo estrés por limitación de nutrientes. La actividad de GLS2 se entrecruza con la detección de aminoácidos y los programas de respuesta al estrés, modulando estados de proliferación y diferenciación en diversos tipos celulares. La expresión desregulada de GLS2/LGA se ha asociado con fenotipos metabólicos alterados observados en oncología y en la fisiopatología relacionada con el hígado, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar mecanismos de reprogramación metabólica.
LGA El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GLS2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
LGA El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GLS2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GLS2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LGA. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GLS2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LGA en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LGA en células tumorales con expresión de GLS2 silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.