LDH-A Double Nickase Plasmid (h): sc-400403-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LDH-A Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LDH-A Double-Nickase-Plasmid (h) und LDH-A Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LDHA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LDH-A: sc-137243
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LDH-A Double Nickase Plasmid (h) | sc-400403-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LDH-A Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400403-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **LDHA** kodiert die Laktatdehydrogenase A (LDH-A), ein zytosolisches Enzym, das die Umwandlung von Pyruvat und Laktat katalysiert und dabei gleichzeitig das NADH/NAD+-System recycelt, wodurch die glykolytische ATP-Produktion unter stark proliferativen oder hypoxischen Bedingungen unterstützt wird. LDH-A ist ein zentraler Knotenpunkt im zentralen Kohlenstoffstoffwechsel: Es verbindet die Glykolyse mit der Laktatfermentation und beeinflusst das Redoxgleichgewicht, den Pyruvatfluss sowie den Metabolitenaustausch mit dem extrazellulären Mikromilieu. Über seinen Einfluss auf die NAD+-Regeneration und die Laktatabgabe trägt LDH-A zu einer metabolischen Umprogrammierung bei, die mit veränderter Glukoseverwertung und Stressanpassung einhergeht. Eine dysregulierte **LDHA**-Expression oder -Aktivität wurde mit Stoffwechselphänotypen in mehreren Krankheitskontexten in Verbindung gebracht und wird häufig im Zusammenhang mit Proliferation, Hypoxiesignalgebung und bioenergetischer Plastizität untersucht.
LDH-A Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LDHA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LDHA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LDHA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LDHA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.