Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
LAT1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401609-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LAT1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LAT1 Double Nickase Plasmid (h) e il LAT1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SLC7A5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LAT1 Antibody (D-10): sc-374232
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LAT1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401609-NIC | 20 µg | $410.00 |
SLC7A5 codifica il trasportatore di amminoacidi di tipo L 1 (LAT1), un trasportatore del sistema L indipendente dal sodio che forma un eterodimero con SLC3A2 (CD98hc) per mediare l’assorbimento di grandi amminoacidi essenziali neutri come leucina, fenilalanina e tirosina. Regolando la disponibilità intracellulare di amminoacidi, LAT1 influenza programmi di nutrient sensing, inclusi la segnalazione mTORC1, il controllo della traduzione e l’adattamento metabolico cellulare. L’attività di LAT1 sostiene stati proliferativi e di risposta allo stress accoppiando il trasporto di amminoacidi alle esigenze redox e bioenergetiche, collegando il trasporto di membrana alle reti di segnalazione di fattori di crescita e oncogeni. Alterazioni dell’espressione di SLC7A5 e della capacità di trasporto degli amminoacidi sono state associate a un metabolismo deregolato nella biologia del cancro e a fenotipi neurosviluppativi e neurologici, nei quali il flusso di amminoacidi influisce sui precursori dei neurotrasmettitori e sull’omeostasi cellulare.
LAT1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC7A5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC7A5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC7A5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC7A5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.