L-type Ca++ CP α1F Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-416338
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- L-type Ca++ CP α1F El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico L-type Ca++ CP α1F, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: L-type Ca++ CP α1F Anticuerpo (1H6): sc-517005
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
L-type Ca++ CP α1F Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-416338 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CACNA1F codifica la subunidad α1F formadora del poro de un canal de calcio tipo L dependiente de voltaje, que media la entrada de Ca2+ en células excitables y acopla la despolarización de la membrana con la señalización intracelular. La actividad del canal modula procesos dependientes de calcio, como la transmisión sináptica, la liberación de neurotransmisores y la expresión génica regulada por la actividad, a través de vías como CaM/CaMK y la señalización calcineurina–NFAT. En la retina humana, la función de CACNA1F es especialmente importante para la neurotransmisión de fotorreceptores a células bipolares y el procesamiento de señales visuales. La alteración genética de CACNA1F se ha asociado con trastornos retinianos hereditarios y fenotipos del neurodesarrollo, lo que respalda su relevancia para estudiar la biología de los canales de Ca2+ y los mecanismos de enfermedad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP α1F (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CACNA1F en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CACNA1F junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CACNA1F tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína L-type Ca++ CP α1F.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CACNA1F para la investigación de la señalización de L-type Ca++ CP α1F, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CACNA1F críticos para la función de L-type Ca++ CP α1F
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CACNA1F para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido L-type Ca++ CP α1F CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido L-type Ca++ CP α1F CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CACNA1F. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR L-type Ca++ CP α1F (h) y el plásmido HDR L-type Ca++ CP α1F (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CACNA1F para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CACNA1F definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.