L-FABP CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401554-ACT

Human FABP1 kodiert das lebertypische Fettsäure-bindende Protein (L-FABP), ein zytosolisches Lipid-Chaperon, das langkettige Fettsäuren, Gallensäuren und andere hydrophobe Liganden bindet, um den intrazellulären Transport und Stoffwechsel zu koordinieren. L-FABP unterstützt die Fettsäureaufnahme, die β-Oxidation, die Dynamik von Lipidtröpfchen und lipidvermittelte Signalübertragung und verknüpft damit die Energiebilanz von Hepatozyten mit PPAR-regulierten Transkriptionsprogrammen und Antworten auf oxidativen Stress. Eine veränderte FABP1-Expression und -Funktion wurde im Kontext metabolischer Lebererkrankungen mit einer dysregulierten hepatischen Lipidverarbeitung und entzündlicher Signalgebung in Verbindung gebracht; zudem wird es häufig als Marker für die Differenzierung von Hepatozyten und den lipidmetabolischen Zustand verwendet. Diese Eigenschaften machen FABP1 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um in humanen Zellmodellen Signalwege zu untersuchen, die Lipotoxizität, mitochondriale Funktion und xenobiotikaresponsive Stoffwechselprozesse steuern.

L-FABP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FABP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

L-FABP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FABP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FABP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen L-FABP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FABP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von L-FABP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des L-FABP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FABP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.