KY peptidase Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421366-ACT

O gene **Ky** em camundongo codifica a **peptidase KY**, uma proteína enriquecida no músculo, implicada na organização do músculo esquelético e na manutenção da integridade dos sarcômeros. A peptidase KY está associada a processos de remodelação do citoesqueleto e de proteostase que sustentam a estabilidade das fibras musculares, com ligações descritas a vias que regulam o desenvolvimento muscular e respostas ao estresse. Alterações na função de KY têm sido relacionadas a fenótipos miopáticos em modelos animais, tornando-a relevante para o estudo de mecanismos de fraqueza e degeneração muscular. Como alvo de pesquisa, **Ky** apoia investigações sobre redes gênicas que controlam a estrutura muscular, a função neuromuscular e programas transcricionais específicos de tecidos.

KY peptidase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ky sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KY peptidase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ky em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ky, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KY peptidase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ky nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KY peptidase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KY peptidase em células tumorais com expressão de Ky silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.