KV1.5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404341

Descripción general

KCNA5 codifica la subunidad humana del canal de potasio dependiente de voltaje KV1.5, un canal de K+ rectificador tardío que conduce la corriente rectificadora tardía ultrarrápida (IKur) y moldea la repolarización de la membrana y la excitabilidad. La actividad de KV1.5 influye en la duración del potencial de acción, las propiedades refractarias y la señalización dependiente de Ca2+ al controlar el potencial de membrana en células eléctricamente activas, lo que lo vincula con una homeostasis iónica más amplia y con vías de remodelado electrofisiológico. La expresión alterada de KCNA5 o la función del canal se han asociado con cambios en la electrofisiología auricular y fenotipos relacionados con arritmias, y también se estudia en contextos en los que el flujo de K+ modula la proliferación y la migración. Como resultado, KCNA5 se investiga con frecuencia en mecanismos de remodelado auricular, canalopatías y redes de señalización sensibles a la dinámica del potencial de membrana.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KV1.5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KCNA5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KCNA5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KCNA5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KV1.5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KCNA5 para la investigación de la señalización de KV1.5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KCNA5 críticos para la función de KV1.5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KCNA5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KV1.5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido KV1.5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KCNA5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KV1.5 (h) y el plásmido HDR KV1.5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KCNA5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KCNA5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.