Plásmido CRISPR de Activación (h) KLK4: sc-404256-ACT

KLK4 codifica la peptidasa 4 relacionada con calicreína, una proteasa de serina secretada que contribuye a la proteólisis extracelular y a la remodelación del microambiente pericelular. Al procesar sustratos asociados a la matriz y a la señalización, KLK4 puede influir en cascadas de proteasas, en programas de diferenciación epitelial y en la comunicación paracrina dentro de tejidos glandulares. La expresión desregulada de KLK4 y su actividad proteolítica se han vinculado con alteraciones de la homeostasis tisular y con la remodelación asociada a tumores, lo que respalda su uso como un nodo funcional en estudios de fenotipos relacionados con la invasión y de señalización regulada por proteasas. KLK4 también se estudia junto con otras calicreínas para cartografiar la regulación coordinada dentro de redes proteolíticas y sus efectos posteriores sobre el comportamiento celular.

KLK4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KLK4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KLK4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KLK4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KLK4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KLK4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KLK4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KLK4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KLK4 en células tumorales con expresión de KLK4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.