KIR4.1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402244
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- KIR4.1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico KIR4.1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: KIR4.1 Anticuerpo (1C11): sc-293252
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
KIR4.1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402244 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen humano KCNJ10 codifica el canal de potasio rectificador entrante KIR4.1, una proteína de membrana que ayuda a establecer el potencial de membrana en reposo y regula el amortiguamiento de potasio y la redistribución espacial de K+ en contextos gliales y epiteliales. KIR4.1 favorece la homeostasis de iones y agua mediante el acoplamiento funcional a procesos de transporte y contribuye al mantenimiento del K+ extracelular y del equilibrio osmótico, influyendo en la excitabilidad neuronal y en la estabilidad del microambiente tisular. La actividad desregulada de KCNJ10/KIR4.1 se ha vinculado con alteraciones de la fisiología glial, interrupción de la homeostasis iónica y fenotipos neurológicos, lo que lo convierte en un objetivo relevante para estudiar vías de señalización y de homeostasis dependientes de canales iónicos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO KIR4.1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KCNJ10 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KCNJ10 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KCNJ10 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KIR4.1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KCNJ10 para la investigación de la señalización de KIR4.1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de KCNJ10 críticos para la función de KIR4.1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KCNJ10 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido KIR4.1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido KIR4.1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KCNJ10. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KIR4.1 (h) y el plásmido HDR KIR4.1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KCNJ10 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KCNJ10 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.