Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ki67: sc-400081-ACT

MKI67 code pour la protéine humaine Ki67, un marqueur nucléaire de prolifération exprimé tout au long des phases actives du cycle cellulaire et largement absent dans les cellules quiescentes. Ki67 contribue à l’organisation de la chromatine à un niveau supérieur et est requise pour une architecture correcte des chromosomes en mitose, soutenant des processus tels que la progression du cycle cellulaire, la dynamique de la chromatine associée à la réplication de l’ADN et la mitose. En tant qu’indicateur de l’indice prolifératif, Ki67 est largement utilisée dans les études de l’homéostasie tissulaire et de la cinétique des populations cellulaires, et une expression altérée de MKI67 est fréquemment associée à une prolifération dérégulée en biologie du cancer et dans d’autres états hyperprolifératifs. La modulation expérimentale de MKI67 permet d’étudier les programmes transcriptionnels couplés à la prolifération ainsi que les voies de contrôle du cycle cellulaire.

Ki67 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MKI67 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ki67 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MKI67 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MKI67, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ki67. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MKI67 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ki67 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ki67 dans les cellules tumorales présentant une expression de MKI67 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.