Keratin 24 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-414948-ACT

KRT24 codifica a queratina 24, uma proteína de filamento intermediário do tipo I que contribui para a integridade estrutural e a resistência mecânica das células epiteliais. Como parte do citoesqueleto de queratinas, a KRT24 participa da organização do citoesqueleto, da coesão célula–célula e de programas de diferenciação epitelial que influenciam a homeostase tecidual e a função de barreira. Alterações na composição da rede de queratinas podem afetar a sinalização de resposta ao estresse e processos de remodelamento associados à desregulação epitelial. Consequentemente, a expressão de KRT24 é frequentemente avaliada em estudos de desenvolvimento epitelial e em contextos relevantes para doenças, nos quais o estado de diferenciação e a arquitetura do citoesqueleto se encontram alterados.

Keratin 24 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KRT24 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Keratin 24 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KRT24 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KRT24, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Keratin 24. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KRT24 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Keratin 24 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Keratin 24 em células tumorais com expressão de KRT24 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.