Integrin αX/ITGAX/CD11c Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-421170-LAC

Itgax codifica l’integrina αX (CD11c), che eterodimerizza con l’integrina β2 (CD18) formando il recettore del complemento 4 (CR4), un recettore chiave per l’adesione e la fagocitosi nelle linee mieloidi, incluse cellule dendritiche, macrofagi e sottopopolazioni di monociti. CD11c partecipa all’adesione e alla migrazione dei leucociti e alla formazione della sinapsi immunologica tramite interazioni con ligandi quali iC3b e le ICAM, collegando segnali extracellulari al rimodellamento del citoscheletro e a vie di segnalazione a valle che modulano l’acquisizione e la presentazione dell’antigene. Nell’immunologia murina, ITGAX è ampiamente utilizzato come marcatore e regolatore funzionale della differenziazione e del traffico tissutale delle cellule dendritiche, con rilevanza per le risposte infiammatorie e la disregolazione immunitaria in modelli di autoimmunità, infezioni e immunologia dei tumori. La perturbazione dell’espressione di Itgax consente di indagare gli stati di attivazione delle cellule mieloidi, la funzione delle cellule presentanti l’antigene e i meccanismi di eliminazione dipendenti dal complemento in vivo e in vitro.

Le particelle di attivazione lentivirale Integrin αX/ITGAX/CD11c (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Itgax in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Integrin αX/ITGAX/CD11c (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Itgax, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Integrin αX/ITGAX/CD11c. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Itgax e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.