Plásmido CRISPR de Activación (h) Integrin αV/ITGAV/CD51: sc-400506-ACT

ITGAV codifica la integrina αV (CD51), una subunidad α que forma heterodímeros con múltiples subunidades β (p. ej., β3, β5, β6, β8) para constituir receptores de ligandos de la matriz extracelular que contienen motivos RGD, como la vitronectina, la fibronectina y la osteopontina. Mediante la unión al ligando y la agrupación de integrinas, las integrinas que contienen αV coordinan el ensamblaje de las adhesiones focales y la mecanotransducción, activando la señalización FAK/SRC y las vías downstream PI3K–AKT y MAPK, que regulan la adhesión, la migración, la supervivencia y la remodelación del citoesqueleto. ITGAV también se relaciona con la biología de TGF-β a través de la activación de TGF-β latente mediada por αVβ6/αVβ8, conectando la detección de la matriz con programas inflamatorios y fibróticos. La actividad desregulada de ITGAV se ha asociado con comportamiento celular invasivo, respuestas angiogénicas y fenotipos de remodelación relevantes para la progresión del cáncer, la fibrosis y las interacciones con el microambiente inmunitario.

Integrin αV/ITGAV/CD51 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ITGAV sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin αV/ITGAV/CD51 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ITGAV en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ITGAV, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin αV/ITGAV/CD51. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ITGAV y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin αV/ITGAV/CD51 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin αV/ITGAV/CD51 en células tumorales con expresión de ITGAV silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.