Plásmido Doble Nickase (h) Integrin αE/ITGAE/CD103: sc-404333-NIC

ITGAE codifica la integrina αE (CD103), que se heterodimeriza con la integrina β7 para formar el receptor de adhesión αEβ7, el cual se une a la E-cadherina y favorece la retención de linfocitos dentro de los tejidos epiteliales. Este receptor participa en la señalización “outside-in” de las integrinas, que coordina la remodelación del citoesqueleto, la migración celular y la dinámica de la sinapsis inmunológica, conectándose con vías que implican quinasas de adhesión focal y la señalización downstream de MAPK y PI3K. CD103 es un rasgo distintivo de las células T de memoria residentes en tejidos y de subpoblaciones de células dendríticas, modulando la vigilancia inmunitaria mucosal y las interacciones con la barrera epitelial. Las alteraciones en la expresión de ITGAE y los infiltrados inmunitarios CD103 positivos se estudian ampliamente en contextos de inflamación crónica y en microambientes inmunitarios tumorales, donde aportan información sobre los mecanismos de localización y función de las células inmunitarias.

Integrin αE/ITGAE/CD103 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITGAE en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITGAE. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITGAE. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITGAE alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.