Plásmido Doble Nickase (h) Integrin β4/ITGB4/CD104: sc-400573-NIC

ITGB4 codifica la integrina β4 (CD104), un receptor transmembrana de adhesión que se asocia predominantemente con la integrina α6 para formar α6β4, un componente central de los hemidesmosomas que conecta las células epiteliales con la membrana basal a través de las lamininas. Mediante su acoplamiento a los filamentos intermedios y la comunicación cruzada con las adhesiones focales y la señalización de factores de crecimiento, ITGB4 regula la polaridad celular, la organización del citoesqueleto y la migración, con efectos aguas abajo sobre las vías dependientes de PI3K–AKT, MAPK y las GTPasas Rho. La expresión o localización alteradas de ITGB4 se asocian con una integridad epitelial desregulada y un aumento del comportamiento invasivo en múltiples contextos de carcinoma, y las variantes patogénicas se vinculan a trastornos ampollosos que implican una adhesión dermoepidérmica comprometida. Estas características biológicas hacen de ITGB4 una diana útil para estudiar la señalización dependiente de la adhesión, la remodelación epitelial y los fenotipos impulsados por la matriz extracelular.

Integrin β4/ITGB4/CD104 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITGB4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITGB4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITGB4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITGB4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.