Plásmido CRISPR de Activación (h) Integrin β4/ITGB4/CD104: sc-400573-ACT

ITGB4 codifica la integrina β4 (CD104), un receptor de adhesión transmembrana que por lo general se asocia con la integrina α6 para formar α6β4, un componente clave de los hemidesmosomas que ancla las células epiteliales a la membrana basal rica en laminina. Mediante su acoplamiento a los filamentos intermedios y la comunicación cruzada con la adhesión focal y la señalización de factores de crecimiento, ITGB4 regula la polaridad epitelial, la migración, la supervivencia y la mecanotransducción, con efectos aguas abajo en vías como PI3K–AKT, MAPK y la remodelación del citoesqueleto. Las alteraciones en la expresión o la localización de ITGB4 se asocian con una adhesión célula–matriz alterada, un comportamiento invasivo aumentado y la remodelación de las barreras epiteliales en múltiples contextos de enfermedad. Dado que α6β4 integra señales de la matriz extracelular con la señalización intracelular, se estudia ampliamente en la señalización dependiente de adhesión, en programas asociados a la EMT (transición epitelio-mesenquimal) y en las interacciones con el microambiente tumoral.

Integrin β4/ITGB4/CD104 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ITGB4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin β4/ITGB4/CD104 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ITGB4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ITGB4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin β4/ITGB4/CD104. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ITGB4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin β4/ITGB4/CD104 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin β4/ITGB4/CD104 en células tumorales con expresión de ITGB4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.