Plásmido CRISPR de Activación (m) Integrin β3/ITGB3/CD61: sc-421175-ACT

Itgb3 codifica la integrina β3 (ITGB3/CD61), una subunidad β que se asocia con αIIb o αV para formar receptores de integrina que median la adhesión célula–célula y célula–matriz. Mediante la unión a ligandos y la señalización bidireccional, la integrina β3 regula el ensamblaje de adhesiones focales, la remodelación del citoesqueleto de actina, la migración y vías de supervivencia, incluidas las señales FAK/Src, PI3K–AKT y MAPK. En sistemas murinos, Itgb3 se estudia ampliamente en la biología de plaquetas y megacariocitos, la angiogénesis, la función de los osteoclastos y el tráfico de células inflamatorias, vinculando su desregulación con fenotipos relacionados con la trombosis, el remodelado vascular y las interacciones tumor–estroma. Estas funciones hacen de ITGB3 un nodo útil para analizar la señalización dependiente de la adhesión y la mecanotransducción en modelos relevantes para el desarrollo y la enfermedad.

Integrin β3/ITGB3/CD61 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Itgb3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin β3/ITGB3/CD61 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Itgb3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Itgb3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin β3/ITGB3/CD61. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Itgb3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin β3/ITGB3/CD61 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin β3/ITGB3/CD61 en células tumorales con expresión de Itgb3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.