Plásmido CRISPR de Activación (h) Integrin β3/ITGB3/CD61: sc-400216-ACT

ITGB3 codifica la integrina β3 (CD61), un receptor de adhesión transmembrana que forma heterodímeros con αIIb (formando αIIbβ3) o con αV (formando αVβ3) para mediar la unión a ligandos de la matriz extracelular como el fibrinógeno, la vitronectina y la fibronectina. A través del ensamblaje de adhesiones focales y de la señalización outside-in/inside-out, la integrina β3 coordina la adhesión celular, la agregación plaquetaria, la remodelación del citoesqueleto y la migración mediante vías que incluyen FAK/SRC, PI3K–AKT y MAPK. La actividad de ITGB3 es fundamental para la función plaquetaria y la formación de trombos, y también contribuye a las interacciones de células endoteliales y tumorales con el microambiente. La desregulación de la señalización de la integrina β3 se ha vinculado con alteraciones de la hemostasia, la inflamación y procesos que favorecen la angiogénesis y la metástasis en múltiples contextos patológicos.

Integrin β3/ITGB3/CD61 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ITGB3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin β3/ITGB3/CD61 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ITGB3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ITGB3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin β3/ITGB3/CD61. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ITGB3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin β3/ITGB3/CD61 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin β3/ITGB3/CD61 en células tumorales con expresión de ITGB3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.