Plásmido Doble Nickase (m) INSR/Insulin Receptor: sc-421142-NIC

Insr codifica el receptor de insulina (INSR) del ratón, una tirosina quinasa receptora que se une a la insulina para iniciar la señalización a través de proteínas adaptadoras IRS y de las cascadas PI3K–AKT y RAS–MAPK aguas abajo. Estas vías coordinan la captación de glucosa, el metabolismo del glucógeno y de los lípidos, la síntesis de proteínas y la supervivencia celular, y además se interconectan con redes de detección de nutrientes como mTOR. La actividad de INSR influye en la sensibilidad a la insulina en tejidos metabólicos como hígado, músculo y tejido adiposo, y modula las respuestas celulares a señales hormonales y nutricionales. La desregulación de la señalización de Insr se utiliza ampliamente como punto de entrada mecanístico para estudiar la resistencia a la insulina, la homeostasis metabólica y los fenotipos endocrino‑metabólicos en modelos de ratón y sistemas celulares.

INSR/Insulin Receptor El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Insr en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Insr. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Insr. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Insr alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.