IGFBP5 Double Nickase Plasmid (h): sc-400945-NIC

IGFBP5 (insulinähnliches Wachstumsfaktor-Bindungsprotein 5) ist ein sezernierter, mit der extrazellulären Matrix assoziierter Regulator der IGF-Signalübertragung, der die Verfügbarkeit von IGF‑I/IGF‑II und deren Bindung an Rezeptoren moduliert und dadurch den Output der PI3K–AKT- und MAPK-Signalwege beeinflusst. Über die Sequestrierung von IGFs hinaus ist IGFBP5 über Matrixinteraktionen und kontextabhängige, IGF-unabhängige Effekte an Programmen der Zelladhäsion, Migration und des Überlebens beteiligt. In menschlichen Geweben ist die Expression von IGFBP5 mit Differenzierungs- und Umbauprozessen verknüpft, einschließlich osteogener und fibrotischer Reaktionen, und wird häufig in Kontexten untersucht, in denen eine veränderte Wachstumsfaktor-Signalgebung Proliferation und Dynamik der extrazellulären Matrix beeinflusst. Eine dysregulierte IGFBP5-Aktivität wurde mit pathologischem Remodeling und Tumorbiologie in Verbindung gebracht, was IGFBP5 für mechanistische Studien zur Wachstumsregulation und Signalgebung im Mikromilieu relevant macht.

IGFBP5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IGFBP5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IGFBP5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IGFBP5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IGFBP5-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.