Plasmide Double Nickase (m) IGF-1 Receptor α/β/IGF1R: sc-421057-NIC

Igf1r code le récepteur du facteur de croissance analogue à l’insuline 1 (IGF‑1R), une tyrosine kinase réceptrice synthétisée sous la forme d’un hétérotétramère α/β qui se lie à IGF‑1 et IGF‑2 afin d’initier des signalisations mitogènes et pro‑survie. Après la liaison du ligand et l’autophosphorylation, IGF‑1R active les voies PI3K–AKT–mTOR et RAS–RAF–MEK–ERK, coordonnant le métabolisme du glucose, la synthèse protéique, la progression du cycle cellulaire et la résistance à l’apoptose. En biologie de la souris, Igf1r est essentiel à la croissance embryonnaire et postnatale, à la régénération tissulaire et au maintien des cellules souches/progénitrices, avec un important dialogue croisé avec la signalisation du récepteur de l’insuline et un contrôle par rétroaction via les protéines IRS. Une signalisation IGF‑1R dérégulée est largement utilisée comme axe modèle dans les études de la transformation oncogénique, des phénotypes associés aux métastases et des troubles métaboliques ou du développement, où le recâblage des voies peut être analysé dans des contextes génétiques définis.

IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Igf1r dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Igf1r. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Igf1r. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Igf1r.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.