Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ICAD Plasmide Double Nickase (h): sc-403560-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ICAD Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ICAD Double Nickase Plasmid (h) e il ICAD Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DFFA. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ICAD Antibody (F-8): sc-17816
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ICAD Plasmide Double Nickase (h) | sc-403560-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ICAD Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403560-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DFFA codifica la subunità alfa del fattore di frammentazione del DNA (ICAD), un inibitore e chaperone fondamentale della nucleasi DFFB/CAD, che governa la frammentazione del DNA durante l’apoptosi. Nel corso dell’apoptosi, il taglio di ICAD da parte della caspasi-3 libera CAD attiva, che genera rotture del DNA a livello internucleosomiale, collegando DFFA alla segnalazione delle caspasi, alla condensazione della cromatina e alla fase esecutiva della morte cellulare programmata. ICAD supporta anche il corretto ripiegamento e la stabilizzazione di CAD, rendendo DFFA importante per una regolazione controllata dell’attività nucleasica e per l’integrità del genoma in condizioni di stress. La disregolazione delle vie apoptotiche associate a DFFA è stata implicata nelle alterazioni della sopravvivenza cellulare e delle risposte al danno del DNA osservate in diversi contesti patologici, inclusi cancro e neurodegenerazione.
ICAD Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DFFA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DFFA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DFFA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DFFA interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.