Plásmido Doble Nickase (h) ICAD: sc-403560-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ICAD consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ICAD (h) y el plásmido de doble nickasa ICAD (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DFFA. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ICAD Anticuerpo (F-8): sc-17816
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ICAD | sc-403560-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ICAD | sc-403560-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DFFA codifica la subunidad alfa del factor de fragmentación del ADN (ICAD), un inhibidor y chaperona esenciales de la nucleasa DFFB/CAD que controla la fragmentación apoptótica del ADN. Durante la apoptosis, la escisión de ICAD por la caspasa-3 libera CAD activa para generar roturas internucleosómicas del ADN, vinculando a DFFA con la señalización por caspasas, la condensación de la cromatina y la fase de ejecución de la muerte celular programada. ICAD también favorece el plegamiento correcto y la estabilización de CAD, lo que hace que DFFA sea importante para una actividad nucleasa regulada y para la integridad del genoma bajo estrés. La desregulación de las vías apoptóticas asociadas a DFFA se ha implicado en cambios en la supervivencia celular y en las respuestas al daño del ADN observados en múltiples contextos patológicos, incluidos el cáncer y la neurodegeneración.
ICAD El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DFFA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DFFA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DFFA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DFFA alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.