I2PP2A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400881

Descripción general

SET (también conocido como I2PP2A) codifica una proteína multifuncional nuclear y citoplasmática que inhibe la fosfatasa de proteínas 2A (PP2A), influyendo así en el control dependiente de la fosforilación de la progresión del ciclo celular, la apoptosis y los programas transcripcionales. I2PP2A participa en la regulación de la cromatina mediante interacciones con histonas y complejos asociados a la cromatina, lo que vincula a SET con las respuestas al daño del ADN, el estrés de replicación y la modulación epigenética de la expresión génica. Al restringir la actividad de PP2A, SET puede afectar ejes de señalización clave como MAPK/ERK y PI3K/AKT, que dependen de un equilibrio en el recambio de la fosforilación. La expresión o actividad desregulada de SET se ha asociado con estados de señalización oncogénica y con procesos neuroinflamatorios o neurodegenerativos, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de la regulación de fosfatasas y de vías asociadas a la cromatina.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO I2PP2A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SET en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SET junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SET tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína I2PP2A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SET para la investigación de la señalización de I2PP2A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SET críticos para la función de I2PP2A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SET para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido I2PP2A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido I2PP2A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SET. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR I2PP2A (h) y el plásmido HDR I2PP2A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SET para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SET definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.