Plasmide CRISPR/Cas9 KO I2PP2A (h): sc-400881

Présentation

SET (également appelé I2PP2A) code une protéine nucléaire et cytoplasmique multifonctionnelle qui inhibe la protéine phosphatase 2A (PP2A), influençant ainsi le contrôle, dépendant de la phosphorylation, de la progression du cycle cellulaire, de l’apoptose et des programmes transcriptionnels. I2PP2A participe à la régulation de la chromatine via des interactions avec les histones et des complexes associés à la chromatine, reliant SET aux réponses aux dommages de l’ADN, au stress de réplication et à la modulation épigénétique de l’expression génique. En freinant l’activité de PP2A, SET peut affecter des axes majeurs de signalisation tels que MAPK/ERK et PI3K/AKT, qui reposent sur un équilibre du renouvellement de la phosphorylation. Une expression ou une activité dérégulée de SET a été associée à des états de signalisation oncogéniques ainsi qu’à des processus neuro-inflammatoires ou neurodégénératifs, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la régulation des phosphatases et des voies liées à la chromatine.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO I2PP2A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SET dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SET, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SET à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine I2PP2A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SET pour l'étude de la signalisation de I2PP2A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SET essentiels à la fonction de I2PP2A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SET pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le I2PP2A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le I2PP2A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SET. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le I2PP2A plasmide HDR (h) et le I2PP2A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SET pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SET définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.