Plásmido Doble Nickase (h) HSF2: sc-402400-NIC

HSF2 (factor de choque térmico 2) es un factor de transcripción específico de secuencia que coordina la expresión génica sensible al estrés y contribuye a la proteostasis al regular las proteínas de choque térmico y las redes de chaperonas moleculares. Más allá de la señalización clásica por choque térmico, HSF2 participa en programas de desarrollo y diferenciación, incluidas las vías neuronales y de células germinales, y se relaciona con la remodelación de la cromatina para modular resultados transcripcionales dependientes del estímulo. La actividad de HSF2 puede modular la progresión del ciclo celular, la susceptibilidad a la apoptosis y las respuestas al estrés proteotóxico, vinculándola con rutas relevantes para la neurodegeneración, la biología del cáncer y trastornos caracterizados por una homeostasis proteica alterada. Se han descrito programas transcripcionales dependientes de HSF2 desregulados en múltiples contextos relevantes para enfermedades, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para estudiar la adaptación al estrés y la regulación transcripcional en células humanas.

HSF2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HSF2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HSF2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HSF2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HSF2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.