Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
HRF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423518
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- HRF El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico HRF, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HRF Anticuerpo (B-3): sc-133131
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
HRF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423518 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen murino **Tpt1** codifica el **factor liberador de histamina (HRF)**, también conocido como **proteína tumoral controlada a nivel translacional**, una proteína citosólica conservada implicada en la regulación del crecimiento celular, las respuestas al estrés y las señales de supervivencia. El HRF participa en vías relacionadas con la homeostasis del calcio, el control de la apoptosis y la modulación de funciones inflamatorias y de las células inmunitarias, con funciones descritas en la liberación de citocinas y en programas de activación celular. La actividad alterada de HRF/TPT1 se ha asociado con inflamación y señalización inmunitaria desreguladas, así como con fenotipos proliferativos anómalos relevantes para la oncología y la remodelación tisular. Estas características convierten a **Tpt1** en una diana útil para analizar mecanismos de adaptación al estrés, regulación inmunitaria y decisiones del destino celular en sistemas de modelos murinos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO HRF (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tpt1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tpt1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tpt1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HRF.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tpt1 para la investigación de la señalización de HRF, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Tpt1 críticos para la función de HRF
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tpt1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido HRF CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido HRF CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tpt1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HRF (m) y el plásmido HDR HRF (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tpt1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tpt1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.