HP1γ Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-417205-LAC

CBX3 codifica la proteina dell’eterocromatina 1 gamma (HP1γ), un “lettore” della cromatina che si lega a H3K9me2/3 tramite il suo cromodominio e coordina l’organizzazione dell’eterocromatina, la regolazione trascrizionale e la stabilità del genoma. HP1γ partecipa al silenziamento epigenetico, alla risposta al danno al DNA, alla tempistica di replicazione e al processamento dell’RNA fungendo da impalcatura per complessi associati alla cromatina e modulando la struttura della cromatina di ordine superiore. Attraverso queste funzioni, CBX3 influenza la progressione del ciclo cellulare, i programmi di differenziamento e le reti trascrizionali responsivi allo stress. Alterazioni dell’attività e della localizzazione di CBX3/HP1γ sono state associate a stati epigenetici deregolati osservati in molteplici contesti oncologici e in altre malattie legate a disfunzioni della cromatina, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sul controllo della trascrizione e sul mantenimento del genoma.

Le particelle di attivazione lentivirale HP1γ (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CBX3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HP1γ (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CBX3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di HP1γ. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CBX3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.