Plásmido CRISPR de Activación (h) HoxB13: sc-401878-ACT

HOXB13 codifica el factor de transcripción homeobox HoxB13, un regulador de unión al ADN específico de secuencia que ayuda a establecer la identidad posicional y los programas de linaje durante el desarrollo embrionario y la diferenciación tisular. Al controlar redes transcripcionales que influyen en las decisiones de destino celular, la maduración epitelial y el patrón de los órganos, HoxB13 contribuye a una regulación de la proliferación y la diferenciación dependiente del contexto. La desregulación de la expresión o la función de HOXB13 se ha vinculado a programas alterados de expresión génica en tejidos sensibles a hormonas, con especial relevancia para la biología de la próstata y estados transcripcionales asociados al cáncer. Como factor de transcripción nuclear, HoxB13 se estudia ampliamente por sus funciones en vías del desarrollo y en circuitos transcripcionales relevantes para enfermedades.

HoxB13 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HOXB13 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HoxB13 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HOXB13 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HOXB13, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HoxB13. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HOXB13 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HoxB13 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HoxB13 en células tumorales con expresión de HOXB13 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.