Plásmido CRISPR de Activación (h) hnRNP U: sc-401375-ACT

HNRNPU codifica la ribonucleoproteína nuclear heterogénea U (hnRNP U), un factor multifuncional de unión a ARN y ADN que se asocia con la cromatina y la matriz nuclear para coordinar la regulación transcripcional, el procesamiento del pre-ARNm y la organización del genoma de orden superior. hnRNP U contribuye al empalme (splicing) cotranscripcional, a la estabilidad del ARNm y a las interacciones de cromatina de largo alcance, vinculando el metabolismo del ARN con la arquitectura nuclear y con programas de expresión génica dependientes del ciclo celular. La alteración en la dosis o la función de HNRNPU se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con desregulación de la expresión génica, lo que lo convierte en un nodo relevante para estudiar mecanismos de regulación del genoma. Su amplio interactoma también conecta a hnRNP U con redes transcripcionales sensibles al estrés y con vías que gobiernan la diferenciación neuronal y la regulación de genes sinápticos.

hnRNP U El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HNRNPU sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

hnRNP U El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HNRNPU en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HNRNPU, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de hnRNP U. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HNRNPU y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de hnRNP U en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía hnRNP U en células tumorales con expresión de HNRNPU silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.