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hnRNP C1/C2CRISPR激活质粒(h) | sc-400993-ACT | 20 µg | $397.00 |
HNRNPC 编码异质性核糖核蛋白 C1/C2(hnRNP C1/C2),这是一类在细胞核内丰度很高的 RNA 结合蛋白,可组装到新生的前体 mRNA(pre‑mRNA)上,调控剪接位点选择、可变剪接的准确性以及 mRNA 成熟。hnRNP C1/C2 参与与转录同步的 RNA 加工,影响 mRNA 的输出与稳定性,并通过协调核糖核蛋白复合体的形成来维持转录组完整性。通过这些功能,它与核心基因表达程序相互衔接,包括 RNA 代谢通路以及与细胞周期相关的转录应答。HNRNPC 表达失衡或 hnRNP C1/C2 活性异常与多种疾病背景下观察到的剪接图谱改变和异常 RNA 加工有关,因此可作为研究 RNA 驱动表型时的一个机制性关键节点。
hnRNP C1/C2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性HNRNPC的表达。
hnRNP C1/C2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的HNRNPC基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于HNRNPC转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性hnRNP C1/C2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的HNRNPC位点,并能够研究内源性位点上依赖于hnRNP C1/C2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在HNRNPC表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟hnRNP C1/C2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。