hnRNP A2/B1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424702-ACT

O gene murino Hnrnpa2b1 codifica a proteína de ligação a RNA hnRNP A2/B1, um componente central dos complexos de ribonucleoproteínas nucleares heterogêneas que coordena o splicing do pré‑mRNA, a exportação de mRNA, a estabilidade e a tradução. A hnRNP A2/B1 participa da regulação gênica co- e pós-transcricional por meio de interações com fatores do spliceossomo e do acoplamento entre transcrição e processamento de RNA, influenciando programas de estado celular como proliferação e diferenciação. Também tem sido implicada na biologia de grânulos de RNA e em respostas ao estresse, conectando o metabolismo de RNA à proteostase e à compartimentalização subcelular. A desregulação do processamento de RNA e da seleção de isoformas dependentes de hnRNP A2/B1 é frequentemente estudada em contextos de neurodegeneração, reprogramação oncogênica e sinalização inflamatória, nos quais a regulação aberrante de RNA contribui para fenótipos associados a doenças.

hnRNP A2/B1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Hnrnpa2b1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

hnRNP A2/B1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Hnrnpa2b1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Hnrnpa2b1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de hnRNP A2/B1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Hnrnpa2b1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de hnRNP A2/B1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via hnRNP A2/B1 em células tumorais com expressão de Hnrnpa2b1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.