Partículas Lentivirales de Activación (h) HNF-6: sc-401082-LAC

ONECUT1 codifica el factor nuclear de hepatocitos 6 (HNF-6), un factor de transcripción específico de secuencia que coordina programas reguladores de genes que gobiernan la diferenciación epitelial y la organogénesis, especialmente en los linajes de hígado y páncreas. HNF-6 integra redes transcripcionales del desarrollo para controlar la actividad de promotores y potenciadores implicados en la especificación hepatobiliar, la expresión de genes del metabolismo de la glucosa y los lípidos, y el mantenimiento de la identidad epitelial. La actividad desregulada de ONECUT1/HNF-6 se ha vinculado con alteraciones en el desarrollo endocrino pancreático y con disfunción hepatobiliar, por lo que es relevante para estudiar el control transcripcional de las vías metabólicas y el compromiso de linaje. En modelos celulares humanos, la modulación de HNF-6 permite investigar circuitos de regulación génica, transcripción dependiente de la cromatina y estados transcripcionales asociados a enfermedad.

Las partículas de activación lentiviral HNF-6 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ONECUT1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HNF-6 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ONECUT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HNF-6. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ONECUT1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.