Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HMCES Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405008
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- HMCES El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico HMCES, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HMCES Anticuerpo (B-2): sc-514238
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
HMCES Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405008 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
HMCES (unión a 5-hidroximetilcitosina, específico de células madre embrionarias) codifica una proteína protectora del ADN que actúa en horquillas de replicación detenidas y en sitios de daño de bases. HMCES forma un intermediario covalente de entrecruzamiento ADN–proteína que protege los sitios abásicos (AP) y lesiones relacionadas, lo que ayuda a coordinar la reparación acoplada a la replicación y a preservar la estabilidad del genoma. Esta actividad se relaciona con la señalización de la respuesta al daño del ADN, la protección de la horquilla y vías vinculadas al control de la mutagénesis durante la fase S. Por ello, la función alterada de HMCES es relevante para estudios de estrés replicativo, fenotipos de inestabilidad genómica y dependencias de reparación del ADN asociadas al cáncer.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO HMCES (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HMCES en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HMCES junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HMCES tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HMCES.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HMCES para la investigación de la señalización de HMCES, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de HMCES críticos para la función de HMCES
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HMCES para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido HMCES CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HMCES CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HMCES. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HMCES (h) y el plásmido HDR HMCES (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HMCES para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HMCES definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.