Partículas Lentivirales de Activación (m) Histone Deacetylase 1 (HDAC1): sc-436647-LAC

El gen Hdac1 de ratón codifica la desacetilasa de histonas 1 (HDAC1), una HDAC de clase I que elimina grupos acetilo de residuos de lisina en histonas y otros sustratos nucleares para regular la accesibilidad de la cromatina y los programas de transcripción. HDAC1 actúa en complejos correpresores multiproteicos, entre ellos SIN3, NuRD y CoREST, lo que la vincula al control del ciclo celular, a las respuestas al daño del ADN y a la diferenciación específica de linaje. Mediante su acoplamiento a factores de transcripción y remodeladores de cromatina, HDAC1 configura estados epigenéticos que influyen en la proliferación, la apoptosis y la expresión génica del desarrollo. La actividad desregulada de HDAC1 se estudia con frecuencia en contextos de represión transcripcional oncogénica, fenotipos del neurodesarrollo y estados de activación de células inmunitarias, lo que la convierte en un nodo central de los mecanismos de enfermedad impulsados por la epigenética en modelos murinos.

Las partículas de activación lentiviral Histone Deacetylase 1 (HDAC1) (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Hdac1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Histone Deacetylase 1 (HDAC1) (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Hdac1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Histone Deacetylase 1 (HDAC1). El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Hdac1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.