Histone Deacetylase 1 (HDAC1) Plasmide Double Nickase (h): sc-400203-NIC

L'HDAC1 umano codifica l'istone deacetilasi 1, una deacetilasi della lisina di classe I che compatta la cromatina rimuovendo i gruppi acetile dalle code istoniche, modulando così i programmi trascrizionali. HDAC1 agisce in complessi corepressori quali Sin3, NuRD e CoREST, collegando la regolazione epigenetica alla progressione del ciclo cellulare, alla replicazione e riparazione del DNA e alla differenziazione. Attraverso il crosstalk con vie che includono la trascrizione dipendente da p53, il controllo RB/E2F e la segnalazione responsiva allo stress, HDAC1 contribuisce a mantenere la stabilità del genoma e un'espressione genica coordinata. Un'attività di HDAC1 deregolata e stati della cromatina alterati sono frequentemente associati a una riprogrammazione trascrizionale oncogena e a una proliferazione aberrante, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici del controllo epigenetico in contesti rilevanti per la malattia.

Histone Deacetylase 1 (HDAC1) Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HDAC1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HDAC1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HDAC1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HDAC1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.