Hic-5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402786

Descripción general

TGFB1I1 codifica Hic-5, un adaptador con dominios LIM localizado en adhesiones focales y en el núcleo que coordina la señalización dependiente de integrinas con respuestas transcripcionales al estrés mecánico. Hic-5 actúa como andamiaje de complejos proteicos implicados en la remodelación del citoesqueleto de actina, la dinámica de recambio de adhesiones y la señalización de GTPasas de la familia Rho, influyendo en el extendido celular, la migración y las interacciones con la matriz extracelular. También se integra con programas sensibles a TGF-β y vías relacionadas que configuran fenotipos fibróticos y de tipo transición epitelio-mesenquimatosa (EMT). La actividad desregulada de Hic-5 se ha asociado con cambios en la remodelación del estroma y con comportamientos celulares invasivos en múltiples contextos relevantes para la enfermedad, lo que respalda su uso como diana de mecanotransducción y de corregulación transcripcional en modelos celulares humanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Hic-5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TGFB1I1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TGFB1I1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TGFB1I1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Hic-5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TGFB1I1 para la investigación de la señalización de Hic-5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TGFB1I1 críticos para la función de Hic-5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TGFB1I1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Hic-5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Hic-5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TGFB1I1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Hic-5 (h) y el plásmido HDR Hic-5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TGFB1I1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TGFB1I1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.