Plásmido CRISPR de Activación (m) Heme Oxygenase 1/HMOX1: sc-420882-ACT

Hmox1 codifica la hemo oxigenasa 1 (HMOX1), una enzima inducible y sensible al estrés que cataliza la degradación del hemo a biliverdina, hierro libre y monóxido de carbono, modulando así el equilibrio redox celular y el manejo del hierro. En células de ratón, HMOX1 está fuertemente regulada por vías de estrés oxidativo y electrofílico, incluida la señalización NRF2/KEAP1, y se entrecruza con programas inflamatorios gobernados por NF-κB y las cascadas MAPK. Al limitar la actividad prooxidante mediada por el hemo y coordinar la ferritina y el secuestro de hierro, HMOX1 influye en la función mitocondrial, la proteostasis y la polarización de macrófagos. La expresión desregulada de Hmox1 se estudia con frecuencia en contextos de lesión tisular, isquemia-reperfusión, aterosclerosis, neuroinflamación y biología del microambiente tumoral, donde convergen el estrés oxidativo y la señalización inmunitaria.

Heme Oxygenase 1/HMOX1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Hmox1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Heme Oxygenase 1/HMOX1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Hmox1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Hmox1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Heme Oxygenase 1/HMOX1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Hmox1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Heme Oxygenase 1/HMOX1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Heme Oxygenase 1/HMOX1 en células tumorales con expresión de Hmox1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.