HEM1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407541-ACT

NCKAP1LはHEM1をコードしており、HEM1はWAVE制御複合体の構成要素の一つで、造血系細胞で高発現するタンパク質です。HEM1はRac GTPアーゼのシグナル伝達をArp2/3依存的なアクチン重合へと結び付けます。分岐状アクチンの組み立てを協調的に制御することで、HEM1は遊走、接着、貪食、免疫シナプス形成に必要な免疫細胞の形態変化を支え、ケモカイン経路やインテグリン経路からのシグナルを統合します。NCKAP1Lの異常は細胞骨格リモデリングを乱し、白血球のトラフィッキングや活性化を変化させ得るため、免疫調節異常や炎症性疾患の機序研究において重要です。さらに、アクチン動態は受容体シグナルや小胞輸送にも影響することから、HEM1は造血系の文脈で、細胞運動、極性、エンドサイトーシスを制御する経路の研究対象としてもしばしば扱われます。

HEM1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NCKAP1Lの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HEM1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NCKAP1L 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNCKAP1L転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HEM1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNCKAP1L遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHEM1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNCKAP1L発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHEM1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。