HCII Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420808

Descripción general

Serpind1 codifica el cofactor II de la heparina (HCII), un inhibidor de proteasas de serina que inactiva selectivamente a la trombina, con una actividad notablemente potenciada por glucosaminoglucanos como el sulfato de dermatán. Al restringir la proteólisis mediada por la trombina, el HCII modula la coagulación e interactúa con vías de señalización impulsadas por la trombina que influyen en la activación plaquetaria, la inflamación vascular y la remodelación de la matriz extracelular. En sistemas murinos, la función de Serpind1 se examina comúnmente en el contexto de la hemostasia y la biología vascular, donde un control alterado de la trombina puede afectar fenotipos relacionados con la trombosis y respuestas inflamatorias. La desregulación del equilibrio serpin–proteasa es relevante en modelos de mecanismos de enfermedad tromboinflamatoria y de respuesta al daño vascular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HCII (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Serpind1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Serpind1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Serpind1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HCII.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Serpind1 para la investigación de la señalización de HCII, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Serpind1 críticos para la función de HCII
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Serpind1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HCII CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido HCII CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Serpind1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HCII (m) y el plásmido HDR HCII (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Serpind1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Serpind1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.