Plásmido CRISPR de Activación (h) Haspin: sc-403076-ACT

GSG2 codifica la quinasa de serina/treonina Haspin, un regulador mitótico que fosforila la histona H3 en Thr3 para crear una plataforma de anclaje del complejo pasajero cromosómico durante la prometafase y la metafase. Esta marca epigenética favorece el enriquecimiento centromérico de la señalización de Aurora B y contribuye a la alineación adecuada de los cromosomas, a la dinámica de cohesión y a una segregación precisa durante la división celular. Mediante su integración con el control del punto de control mitótico y la señalización basada en cromatina, Haspin vincula la fosforilación de histonas con la función del cinetocoro y la organización del huso mitótico. La actividad desregulada de Haspin se ha asociado con fenotipos proliferativos e inestabilidad genómica, lo que convierte a GSG2 en un nodo útil para estudiar la regulación de la cromatina dependiente del ciclo celular en contextos relevantes para el cáncer.

Haspin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GSG2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Haspin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GSG2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GSG2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Haspin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GSG2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Haspin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Haspin en células tumorales con expresión de GSG2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.