Plásmido Doble Nickase (h) HADHB: sc-403234-NIC

HADHB codifica la subunidad beta de la proteína trifuncional mitocondrial, un complejo enzimático central que cataliza pasos clave de la β‑oxidación de ácidos grasos de cadena larga, incluida la actividad tiolasa de 3‑cetoacil‑CoA de cadena larga. A través de su papel en el metabolismo energético mitocondrial, HADHB contribuye a mantener la producción celular de ATP y la homeostasis lipídica, especialmente bajo un alto flujo de ácidos grasos. La alteración de la función de HADHB se asocia con trastornos hereditarios de la oxidación mitocondrial de ácidos grasos, como la deficiencia de la proteína trifuncional mitocondrial y la deficiencia de la deshidrogenasa de 3‑hidroxiacil‑CoA de cadena larga, que pueden manifestarse con descompensación metabólica y cardiomiopatía. Por ello, HADHB se estudia ampliamente en vías que vinculan la disfunción mitocondrial, el estrés oxidativo y el daño celular impulsado por lípidos.

HADHB El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HADHB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HADHB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HADHB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HADHB alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.