Plásmido Doble Nickase (h) HADHA: sc-402803-NIC

HADHA codifica la subunidad alfa de la proteína trifuncional mitocondrial, un componente central de la β-oxidación de ácidos grasos que cataliza las etapas de enoil‑CoA hidratasa y 3‑hidroxiacil‑CoA deshidrogenasa necesarias para el metabolismo de acil‑CoA de ácidos grasos de cadena larga. Mediante su acoplamiento con HADHB, HADHA sostiene la homeostasis energética durante el ayuno y en situaciones de alta demanda oxidativa, conectando el catabolismo lipídico con la función mitocondrial y el equilibrio redox. La alteración de HADHA se asocia con trastornos de la oxidación mitocondrial de ácidos grasos, incluida la deficiencia de 3‑hidroxiacil‑CoA deshidrogenasa de cadena larga y la deficiencia de la proteína trifuncional mitocondrial, que pueden manifestarse con cardiomiopatía, hipoglucemia hipocetósica y miopatía. Por ello, HADHA se estudia ampliamente en respuestas al estrés metabólico, proteostasis mitocondrial y señalización impulsada por lípidos relevante para la biología neuromuscular y cardiaca.

HADHA El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HADHA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HADHA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HADHA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HADHA alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.