Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
HADHA Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430176
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- HADHA El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico HADHA, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HADHA Anticuerpo (E-8): sc-374497
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
HADHA Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-430176 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Hadha en ratón codifica la subunidad alfa de la proteína trifuncional mitocondrial (HADHA), un complejo enzimático clave en la β-oxidación de ácidos grasos de cadena larga que cataliza las actividades de enoil-CoA hidratasa y 3-hidroxiacil-CoA deshidrogenasa. HADHA respalda el metabolismo energético mitocondrial al acoplar el catabolismo de lípidos a la producción de acetil-CoA y al flujo posterior del ciclo del TCA, con amplios efectos sobre el equilibrio redox y la adaptación metabólica. La alteración de la función de HADHA se asocia con un uso deficiente de ácidos grasos por parte de la mitocondria y es relevante para errores congénitos del metabolismo que afectan a tejidos oxidativos como el hígado, el corazón y el músculo esquelético. Por ello, Hadha se estudia ampliamente en vías que se cruzan con la homeostasis mitocondrial, las respuestas al estrés por nutrientes y la señalización impulsada por lípidos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO HADHA (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Hadha en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Hadha junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Hadha tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HADHA.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Hadha para la investigación de la señalización de HADHA, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Hadha críticos para la función de HADHA
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Hadha para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido HADHA CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido HADHA CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Hadha. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HADHA (m) y el plásmido HDR HADHA (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Hadha para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Hadha definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.